Grabovská, Simona, 1997-
Produkce a charakterizace exosomů za fyziologických a patologických podmínek [rukopis] / Simona Grabovská. -- 2024. -- 79 : il., grafy, tab. -- Oponent Michaela Liegertová. -- Ved. práce Regina Herma. -- Ved. práce Michaela Kocholatá. -- Abstrakt: Tato práce se zabývá izolací a charakterizací exozomů produkovaných buňkami glioblastomové nádorové linie U87 za normoxických a hypoxických podmínek. Cílem bylo analyzovat velikost, koncentraci a polydisperzitu těchto exozomů, včetně koncentrace proteinů přítomných ve vzorcích. Exozomy byly nejprve izolovány z kultivačních médií metodou ultracentrifugace. Získané vzorky byly následně charakterizovány pomocí metod dynamického rozptylu světla (DLS), analýzy sledování nanočástic (NTA) a stanovením kyseliny bicinchoninové (BCA). Výsledky ukázaly, že hypoxické podmínky vedou k vyšší koncentraci proteinů ve vzorcích, což může odrážet adaptivní odpovědi buněk na stresové podmínky nebo zvýšenou kontaminaci izolátů. Hypoxie dále vedla k produkci menších exozomů, které by se mohly podílet na progresi nádoru. Rovněž byl pozorován nárůst polydisperzity u hypoxických vzorků, související s přítomností agregátů. Přítomnost agregátů pravděpodobně ovlivnila měření koncentrace hypoxických exozomů k nižším hodnotám, než byly naměřeny u normoxických exozomů. Na základě těchto výsledků byla doporučena další zkoumání pro pochopení specifických mechanismů vedoucích k těmto změnám.. -- Abstrakt: This diploma thesis focuses on the isolation and characterization of exosomes produced by the glioblastoma cell line U87 under normoxic and hypoxic conditions. The aim of this study was to analyze the size, concentration, and polydispersity of these exosomes, including the concentration of proteins present in the samples. Exosomes were first isolated from the culture media using ultracentrifugation. The obtained samples were then characterized using dynamic light scattering (DLS), nanoparticle tracking analysis (NTA), and bicinchoninic acid assay (BCA). The results showed that hypoxic conditions lead to a higher concentration of proteins in the samples, which may reflect adaptive cellular responses to stress conditions or increased contamination of samples. Hypoxia also resulted in the production of smaller exosomes, which could contribute to tumor progression. Additionally, an increase in polydispersity was observed in hypoxic samples, associated with the presence of aggregates. The presence of aggregates likely influenced the measurement of exosome concentration, leading to lower concentration results under hypoxic conditions compared to normoxic conditions. Based on these findings, further investigations are recommended to understand the specific mechanisms underlying these changes.
Liegertová, Michaela. Herma, Regina, 1997 -. Kocholatá, Michaela, 1997 - konzultant z univerzity. Univerzita J.E. Purkyně v Ústí nad Labem. Katedra chemie
Exozomy. glioblastom. normoxie. hypoxie. ultracentrifugace. charakterizace. dynamický rozptyl světla (DLS). analýza sledování nanočástic (NTA). stanovení kyseliny bicinchoninové (BCA). Exosomes. glioblastoma. normoxia. hypoxia. ultracentrifugation. characterization. dynamic light scattering (DLS). nanoparticle tracking analysis (NTA). bicinchoninic acid assay (BCA). diplomové práce
(043)378.2